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1、 光盘使用说明 一 系统要求 奔腾以上微机 以上内存 光驱速度不低于 速 硬盘容量大于 和 51 4 7 A 和 4 7 B2CD 用来上下翻页 三 特别说明 由于不同用户的机器配置和安装的程序影响 加之 012345 674871 软件对亚洲 语言的支持能力 用户在使用本光盘时 有时会出现与显示有关的错误信息 此 时 您直接敲回车键忽略即可 注 本软件与配套的图书资料结合使用 编委会 主编缪勇臧广州 编委黄国庆游林恩韩宝江董雪连焦裕仁 王福良聂林倪建国徐春跃徐克刚 曹南金于新发钟子擅高原高明珍 郭家河袁大刚王存茂周耀武金光辉 赵宝玉郝静钟志超王振金张挂林 陈代玉陈兆和陈恩一林秀王和 前言 现

2、代医学模式由生物医学模式向生物 心理 社会医学模式转变 传统医学发挥着越来越大的作用 化学药物的毒副作用大 易产生抗药 性 而中药天然药物在这方面具有无可比拟的优势 纯化合物新药开发 难度大 周期长 费用高 使植物提取物和复方药物的开发成为新的选 择 回归自然 绿色 消费成为时尚 使天然植物药理所当然地成 为现代医疗保健的良好选择 对植物药的认可 营造了巨大的天然植物产品市场 在国际医药市 场上 天然药物已占 份额 市场销售额约 亿美元 第一篇中草药生产现代化总论 有的化学成分可能超过 种 例如人参 茵陈等中药所含有机化合物已接近 种 还不断有新的化学成分被发现 长春花中吲哚生物碱就已超过 种

3、 加上其他 成分 已超过 种 一个由四至五味中药组成的复方 可能有 当然 这种设想的实现尚待实践研究 第一篇中草药生产现代化总论 第三章中药生产质量控制 中药要现代化 规范化 走向世界 其中一个重要的方面是中药分析技术要现代 化 简化前处理 提高分离能力和检测水平 同时需提高中药质量标准 完善检测项 目 采用现代检测技术 以使中药质量稳定可控 中药成方制剂是严格按中医理论和 用药原则组方的 十分强调整体效应及各成分之间的协同作用 因此要求更严格和科 学的质量控制方法 中国 年版药典一部共收载中药 种 其中药材 5187 于分液漏斗中加水 85 3 加 05 硫酸 0 次除去酸性杂质 水相再以

4、氨水碱化 用氯仿提取 9 次直至提尽生物碱 有机相的滤液于水浴上蒸干 残渣溶于 8 3 甲醇 可稍加热 加甲红指示剂 8 滴 用硫酸滴定液 5150 3 滴定至红色 再 加新沸放冷的蒸馏水 95 银翘解毒片中薄荷和荆芥鉴别用供试液的制备 取本品 05 片研碎 加硅 藻土 0167 研匀 置具塞瓶中 加石油醚 85 3 多次振摇 放置 08 89 过滤 浓缩 石油醚至 8 3 供 234 鉴别用 例 9 分光光度法测定山苍子栓中柠檬醛的供试品溶液制备 取栓剂 05 粒 精 密称重 求出平均粒重 水浴加热熔融栓剂并混匀 待冷凝后 精密称取 0197 于 055 3 量瓶中 加无水乙醇近刻度 微温使

5、溶解 6 05 放置89 加乙醇至刻度 摇 匀 过滤 取续滤液 05 3 于 86 3 和氯仿 85 3 加热回流 0 放冷 过滤 滤液加稀盐酸 6 3 A8 第一篇中草药生产现代化总论 与水 振摇 分取酸水层 加浓氨水调 可破坏细胞 加速组分的溶出 由于超声波的助溶作 用 超声提取法较冷浸法效率高 但超声过程的热效应使溶剂有一定损失 定量时应 予以补偿 例 2 高效液相色谱 至少 0 34 放置至室温后 加无水乙醇稀释至刻度 摇匀 过滤 取续滤液 备用 例 穿心莲片中穿心莲内酯的供试品溶液的制备 取本品 9 片 除去包衣 精 密称重 研细 称取约 0 精密加甲醇 冷浸 28 超声处理 0 3

6、4 放冷 精密称 重 用甲醇补充减失的重量 过滤 取续滤液 备用 第一篇中草药生产现代化总论 二 液 液提取 液 液提取 硫酸酸化至 09 3 2 再以乙酸乙酯提取 次 合并提取液 于水浴上浓缩并定容至 4 3 A 精密称重 加水 9 蒸镏 收集蒸馏液 92 用氯化钠饱和 用石油醚 3 B C 提取 4 次 合并提取液 约 以 9 D氢氧化钾溶液提取 4 次 合并提取 液 用石油醚洗涤 提取液移入碘瓶中 加热除去溶剂 放冷 即得 4 第一篇中草药生产现代化总论 三 色谱法 色谱法 9 蒸干 残渣加乙酸乙酯 9 溶解 溶液加到已处理好的中性氧化铝柱 5 5 内径 5 上 用乙酸乙酯 5 9 洗脱

7、 洗脱液蒸干 残渣加乙酸乙酯 6 9 使溶解 即得 例 739 测定四君子丸中甘草酸的供试品溶液的制备 取本品研细 精密称 取细粉适量 加蒸馏水 1 过滤 重复煎煮一次 合并两次滤液 适当 浓缩后离心 使上清液成 9 5 9 提取液相当于 5 生药 精密量取 6 9 以 脱气后的甲醇水 AB 稀释至 9 经硅镁吸附型小柱过滤 即得 例 树脂吸附分离比色法测定复方丹参片中三七总皂苷供试品溶液制备 取 本品剥去糖衣 取 5 片精密称重 研细 精密称取 置 9 具塞锥形瓶中 精密 加入甲醇 离心 精密量取上清液 9 挥干甲醇 残渣加 蒸馏水 9 溶解 用石油醚提取 合并石油醚 用少量蒸馏水洗涤 水层

8、与洗液合并 在水浴上浓缩至近 5 9 将浓缩液加到含吸附树脂 C 型 B 目 6 另加中性 氧化铝 6 内径 D 中 逐毫升加入蒸馏水 共加 5 9 洗脱液流速为 6B 9E 1 弃去水液 继续用 D F乙醇 5 9 洗脱 收集乙醇液 置水浴上蒸干 残渣用 甲醇分次溶入 次 合并煎液 过滤 水浴浓缩至 5 5 9 加 5 倍量乙醇沉淀 冷置 BG 过滤 浓缩至 5 9 以下 移至 5 9 量瓶中 加乙醇至刻度 精密量取 5 9 水浴蒸干 残渣加水 9 使溶 加到装有药用炭 6 和硅藻土 6 的吸附柱中搅匀 放置 5 1 减压 过滤除去溶剂 依次用 F 5 F甲醇洗脱 收集 D F以上甲醇洗脱液

9、 减压挥干 残渣加乙醇溶解 定容至 第一篇中草药生产现代化总论 例 鉴别小青龙合剂中甘草酸供试液制备 量取合剂 通过聚酰胺柱 不需加热就能将溶 质与溶剂二氧化碳分离 该法具有提取时间短 提取效率高 无溶剂残留 不引起热 不稳定成分的损失 对于中药及其制剂中待测成分的提取尤为有利 例如 马蓝 菘 蓝和蓼蓝中靛玉红的提取 提取温度 799 压力为 6 静态萃取时间 8 A 加入改性剂氯仿 985 AB 动态萃取量 AB 第二节中药材质量控制方法 一 鉴别 鉴别系指检定药材真实性的试验 包括经验鉴别 显微鉴别和理化鉴别 根据具 体情况和鉴别专属性而有选择 经验鉴别是指简便易行的传统方法 观察颜色变化

10、 浮沉情况以及爆鸣 色焰等特征 显微鉴别系指用显微镜观察药材切片 粉末或表面 等的组织 细胞特征或显微化学特征 理化鉴别系指用化学或物理的方法对药材中 所含某些化学成分进行的鉴别试验 包括一般理化试验 色谱和光谱等试验 色谱鉴 别应设立对照品或对照药材 78 化学反应 取药材粉末 经处理或用溶剂提取后 加入化学试剂 观察供试液呈色 沉淀或生 成气体等反应 应选择专属性强 反应明显的反应作为鉴别试验 例如 伸筋草的鉴别 取本品粉末 6 C 加乙醇 69 AB 加热回流 59 A 过滤 滤液 蒸干 残渣加 7D盐酸溶液 79 AB 搅拌 过滤 滤液用氨试液调节 E 至 F 用氯仿 79 AB 提取

11、 氯仿液蒸干 残渣加 7D盐酸溶液 AB 使溶解 取溶液各 7 AB 分置 5 支试 管中 一管加碘化钾试液 5 滴 即生成橙红色沉淀 另一管加硅钨酸试液 5 滴即生成 白色沉淀 58 荧光反应 将药材 包括断面 浸出物等 或经过处理后 置紫外灯下约 79 769 用 法对分类群间的 0 0A 相似性系数和遗传距离进行聚类分析 结果表明 溪黄草与线纹香茶菜 狭基 线纹香茶菜 细花线纹香茶菜之间的亲缘关系较远 可用 技术对中药的正本 清源 真伪品及质量进行研究 例 8 金钱白花蛇及其伪品的 4B1C 基因片段序列分析和 4 鉴别 对金钱白花 蛇及其伪 混品药材和原动物的 4B1C 的基因片段的序

12、列分析发现 该基因片段在金 钱白花蛇及其伪品间的差异远远大于金钱白花蛇种内个体间的差异 是理想的用于 鉴别金钱白花蛇及其伪混品的分子遗传标记 在对 4B1C 基因片段序列分析的基础 上 设计了金钱白花蛇 4 鉴别的一对高度特异性引物 DEF G 和 DEH G 结果 表明 该对引物在对金钱白花蛇的 4 鉴别中 用 I J I K的复性湿度 可以 9 检出金钱白花蛇 误检率和漏检率为 并能在混合的药材粉末中检测出被检样品中 是否含有金钱白花蛇组分 本研究还表明 4 鉴别将有可能成为中成药复方组分 鉴别的一种新手段 67 中药指纹图谱 中药作用的特点是多成分整体性 除单一成分外 有效部位的测定是其

13、质量控制 的重要部分 中药成分指纹图的测定技术包括 LF4 4 H F4 电泳 O P 射线衍射和分子生物学技术等 中药材指纹图谱系指中药材经适当处理后 采用一定的分析手段 得到能够标示 该中药材特性的共有峰的图谱 如果原药材需经过特殊炮制 如醋制 酒制 炒炭 等 则应制定原药材和炮制品指纹图谱的检测标准 指纹图谱对复杂的色谱鉴别可 提供较丰富的特征信息 有时可给出种间的区别特征 但应注意样品代表性 方法重 复性与重视性 供试品的制备方法必须确保主要化学成分在指纹图谱中体现 制定指纹图谱必 须选择适宜的对照品或内标物作为参照物 对于成分复杂的中药材 可建立多张指 纹图谱 测定条件必须标准化 规

14、范化 采用 H F4 和 4 其指纹图谱的记录时间一般为 但应提供 8 的记录图 采 用 LF4O 须提供从原点至溶剂前沿的图谱 采用光谱法 须按各种光谱的相应规定提 IQ 第一篇中草药生产现代化总论 供全谱 色谱法采用相对保留值 光谱法采用波长或波数标定指纹峰 以对照品作 为参照物者 以参照物峰面积作为 计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比 值 以内标物作为参照物者 则以共有指纹峰中其中一个较大 较稳定的峰面积作为 计算其他各共有指纹峰面积的比值 中药材的供试品图谱中各共有峰面积的比值 与指纹图谱各共有峰面积的比值比较 单峰面积占总峰面积大于或等于 的共有 峰 其差值不得大于 大于或等于

15、而小于 的共有峰 其差值不得大于 放冷 用丙酮补足减失的质量 再加氯化钠约 0 8 及二氯甲烷 91 56 称 重 超声处理 5 用二氯甲烷补足减失的质量 再加氯化钠约 8 及二氯甲烷 91 56 称重 超声处理 91 5 放冷 用丙酮补足减失的质量 再加氯化钠约 0 8 及二氯 甲烷 91 56 称重 超声处理 5 用二氯甲烷补足减失的质量 静置使分层 将有机 相迅速移入装有适量无水硫酸钠的 11 56 具塞锥形瓶中 放置 7 精密量取 9 56 于 714水浴减压浓缩至近干 加少量石油醚 01 2 314 如前反复操作至二氯甲 烷及丙酮除净 用石油醚 01 2 314 溶解并转移至 1 5

16、6 具塞刻度离心管中 加石油 醚 01 2 314 至 56 小心加硫酸 56 振摇 5 5 1 5 精密 量取上清液 56 置具刻度的浓缩瓶中 连接旋转蒸发器 714下 或用氮气 将溶液 浓缩至适量 精密稀释至 56 0 测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各 6 分别连续进样 9 次 取 9 次平均值 按外标法计算供试品中 3 种农药残留量 六 六六 总 43 的乌头碱 00 分光光度法 0 番泻叶含量测定操作全过程避光进行 所有试剂均须临用前配制 取本品 细粉约 02 3 精密称定 置圆底烧瓶中 加水 4 混匀 称定质量 连接冷凝管 置水浴中加热 02 4 放冷

17、称定质量 补足减失的质量 摇匀 离心 精密量取上清液 4 置 02 4 分液漏斗中加 4789 盐酸溶液 0 4 用氯仿振摇提取 次 每次 02 4 弃去氯仿层 水层加碳酸氢钠 0 3 振摇 4 离心 精密量取上清液 0 4 3 为固定相 涂布浓 度为 柱温 8 7 理论板数按丁香酚峰计算应不低于 以下放置 7 的下层溶液为展开剂 展开 取出 晾干 喷以 5硫酸乙醇溶液 在 加热至斑点显色清晰 取出 在薄 层板上覆盖同样大小的玻璃板 周围用胶布固定 按薄层色谱扫描法进行扫描 波长 0 和人参皂苷 8 4 3 4 的总量不得少 于 0 5 第三节中药制剂质量控制方法 中国药典收载的中药剂型有 丸

18、剂 水丸 蜜丸 散剂 颗粒剂 片剂 锭剂 煎膏 剂 胶剂 糖浆剂 合剂 滴丸剂 胶囊剂 酒剂 酊剂 流浸膏剂与浸膏剂 膏药 橡胶膏 剂 软膏剂 露剂 茶剂 注射剂 栓剂等 中药制剂的质量标准须在处方 药味和用 量 固定和各组分质量稳定与制备工艺成熟的前提下制定 一 鉴别 根据中医药理论 依组方原则首选君药 贵重药和毒剧药 易混淆药材及货源紧 4 第一篇中草药生产现代化总论 张的药材 再选其他药味鉴别 凡制剂中含有原药生粉的可以做显微鉴别 但应突出 易察见的特征 没有显微鉴别的药味应尽可能作理化鉴别 药味较少的品种也应尽 可能作理化鉴别 处方中某一药味通常选择 个专属性较强的理化鉴别 中药制剂多

19、为复方 其显微特征 理化鉴别常受干扰 必须相互核对验证 选择专 属性强 重现性好 灵敏度高 且比较简便的方法 化学反应鉴别 紫外光谱特征鉴别 等 均需先有分离 提取和纯化步骤 色谱法鉴别应选择合适的对照品或对照药材进 行对照试验 重现性好 确能反映组方药味特征的色谱或指纹图也用于鉴别 化学反应 十五味沉香丸鉴别取本品粉末 8 大于或等于 8而小于 8的共有峰 其差值不得大于 8 大于或等于 8而小于 8的共有峰 其差值不得大于 8 小于 8的共 有峰 峰面积比值不作要求 但须标定相对保留值 保留时间超过 的共有峰 单峰面积占总峰面积大于或等于 8的共有峰 其差值不得大于 8 小于 8 的共有峰

20、 峰面积比值不作要求 但须标定相对保留值 非共有峰面积不得大于总峰 面积的 8 为了确保制备工艺的科学性和稳定性 应根据中药材 有效部位 中间体和注射 剂的指纹图谱 标定图谱之间的相关性 为 1 溶出量大于 五 注射剂检查项目 国家药品监督管理局要求 凡 中国药典 现行版附录注射剂项下规定的检查项 61 第一篇中草药生产现代化总论 目 均应按其有关规定检查 并根据不同给药方法的要求 还应对以下项目进行相关 的研究考察 色泽 与 中国药典 现行版方法配制的比色对照液比较 色差应不超过色号 个色 号 或经研究制定出可行的检查方法及标准 6 6 置 6 纳氏比 色管中 同上操作 作为对照品管 取供试

21、品管和对照品管进行目测比浊 供试品管 5 第一篇中草药生产现代化总论 不得更浊 树脂 取注射液 加盐酸 计算 本品含牡丹皮按丹皮酚计 水蜜丸每 不得少于 理论板数按十五烷峰计算应不低于 9 校正因子测定 取正十五烷适量 用乙酸乙酯溶解并制成每 9 8 约含 1 0 的溶 液 作为内标溶液 另取冰片对照品约 9 0 精密称定 置 8 量瓶中 精密加入内 标溶液 9 8 加乙酸乙酯至刻度 摇匀 取 9 8 注入气相色谱仪 计算校正因子 测 定法 取本品 9 丸 精密称定 研细 或取本品 9 丸 精密称定 每丸各取四分之一 合并 精密称定 精密加入等量硅藻土 研匀 精密称取适量 约相当于冰片 9 0

22、 置具塞试管中 精密加入内标溶液 9 8 与乙酸乙酯 8 密塞 振摇使冰片溶解 静 置 取上清液 9 8 注入气相色谱仪 测定 按内标校正因子法计算 本品每丸含冰片 以龙脑 49 9 和异龙脑 9 9 的总量计 应为 9 0 高效液相色谱法 香砂养胃丸含量测定 取本品适量 研细 取 0 精密称定质量 置索氏提取器 中 加石油醚 取提取液挥干 残渣用甲醇溶解 转 移至 8 量瓶中 用甲醇稀释至刻度 摇匀 过滤 取续滤液作为供试品溶液 另取 厚朴酚对照品适量 用甲醇制成约 9 07 8 作为对照品溶液 分别精密吸取上述 两种溶液各 9 8 注入液相色谱仪 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 乙腈 水

23、冰乙酸 为流动相 检测波长为 第一篇中草药生产现代化总论 提供较多的鉴别信息 但是应注意 对于具有多种来源的药材 各品种之间的色谱图 可能有差别 应以共同具有的特征斑点作为鉴别依据 必要时 化学成分单体与药材 对照品可同时应用 灵敏度 微量组分的鉴别 对试验有灵敏度要求 简便 鉴别方法的操作应尽可能简单 二 含量测定 中药材含有多种成分 中成药则多为复方制剂 成分更加复杂 中药含量测定方 法学研究 对控制中药产品质量和制定中药质量标准具有非常重要的意义 由于中药组织及其成分的复杂性 分析前均需进行提取 分离和纯化等处理步 骤 而样品的处理条件将直接影响测定结果 因此 对提取溶剂 方式 时间 温

24、度 等均需进行优化 65 6 8 6 756 8 8 实验室内的变异如不同天 不同分析者 不 同仪器对建立的分析方法的影响 中间精密度也是方法通用性的体现 对同一批均 匀样品 精密度实验要求样本数大于五 相对标准偏差 A 一般要求小于 体系是 9 的重要内容 主要用于经常性地检查所用中药 分析方法的效能如检测偶然误差 精密度 系统误差 准确性 样品基质的影响 分 5 第一篇中草药生产现代化总论 析仪器的校正等 一种分析方法的实验室内部 可用校正样品 世纪 1 和 2 从理论上提出超临界流体用于萃取分离的可能性 年代西德对这一技术首先 做了大量基础应用研究 5 年代以后 各国不断有大量专利涌现

25、3654 年 3 月在西 德首次举行 技术研讨会 同年德国建成第一套工业化规模超临界萃取装置用于 咖啡因生物碱的萃取 技术在食品工业尤其是啤酒花的提取已形成生产规模 364 年 西德 AB 公司投产了第一套大规模超临界 CD 流体萃取工业化装置 E 超临界萃取在食品行业中啤酒花的萃取工业化已有了商业效率 在中草药活性 成分的提取也有了工业规模的应用 目前广州 北京 江苏 上海等地有超临界萃取 设备的制造厂家 随着 工业设置的应用 用于分离提取的中草药品种和工艺技 术也在进一步发展 有银杏叶 金银花 月见草 黄花蒿等数十种中草药已开发了成熟 的 F CD 工艺技术 技术工业化的推广对中草药加工

26、中药制剂生产的现代 化发展及进入国际市场将会起到积极推动作用 二 原理 物质处于临界温度和临界压力点时 表现出独特的性质 即呈现出不同于液体和 气体的流体状态 超临界流体兼有液体和气体的优点 有气体的高扩散系数的低粘 4 第二篇中草药的提取和初步分离 度 有液体的高密度 良好的溶解特性和传质特性 超临界流体的这种特性对体系的 压力 温度变化十分敏感 从而可以通过改变体系的温度和压力来调节组份的溶解 度 在临界点附近 温度和压力的微小变化往往会导致溶质的溶解度发生几个数量 级的变化 常见的超临界体系有 水 氨 丙烷 丙烯 甲醇 乙醇等 其中 体 系因其具有临界温度低 对大部分物质呈化学惰性 选择

27、性好 不残留于萃取物上 安 全廉价无污染等优点而被广泛应用 三 超临界 萃取装置 超临界 萃取过程一般为 压缩 萃取 减压和分离四个阶段 图 先 将原料装入萃取釜中 启动高压泵 把 升压 加热进入萃取釜 在萃取釜中达到超 临界状态的 对物料进行萃取 完成后打开节流阀减压 溶有有效成分的 由 分离器底部每隔一定时间放出萃取产物 也有升温加压 保持恒温 恒压分离萃取产 物 通过过滤器 流量计 再经缓冲罐 热交换器等 加压液化循环使用 要添 加夹带剂的经升压与 进入混合器以一定比例混合后 入萃取釜 图 超临界 萃取装置图 四 超临界 体系的特点 7 在这个温度下 改变压力可有效改 变其密度和溶解度特

28、性 高于此温度改变压力其密度和溶解性特性变化幅度小 萃取 效果差 低于此温度 易低于临界温度 失去其溶解特性 A 第二篇中草药的提取和初步分离 从临界压力起逐步加大压力 由于各压力梯度的超临界流体性质不同 对溶质溶 解能力不同 按被萃取成分的极性大小 沸点高低和分子大小可依次被萃取出来 对 某一组份而言 压力增大可使溶剂强度增加 溶质溶解度增大 但到达某一阈值后再 升高压力 溶解度不再增加 萃取物质颗粒大小溶质从样品颗粒中的扩散可用 第二定律描述 颗粒的大 小可影响提取回收率 减少颗粒粒度 可增加回收率 此外 3 无分流进样口上 进样口中 步骤中产生气 体高流速可通过选择合适分流比来调节 因此

29、在 过程可使用高流速 厚液膜和 中低冷凝捕集温度可有效对挥发物进行收集 分流 在高分流比情况下 可分析较大样品和含水样品 在线联用 梁延寿介绍了 联用技术在生药分析中的应 用 包括在线联用 在线联用装置操作 工作条件选择 并比高分辨多波长紫外检测 器对咖啡豆中的咖啡 生姜中的姜辣素进行分析 同时考察了不同条件对分离分析的 影响 6 2 14 等用柱头收集 在线联用分析厚朴中的厚朴酚和厚朴酚含 量 AB 在线联用 曾美怡认为 AB 在线联用可比简化和加速生药 薄层色谱分析的前处理 即可用于常规生药定性检识 也可作为获得大规模萃取有关 参数手段 介绍了超临界流体萃取薄层色谱联用仪及将其用于德国母菊

30、花的分析结 CC 第二篇中草药的提取和初步分离 果 77 利用 9 菌体中分离环孢素 纯度ABB 酶 蛋质等物质用 234进行分离和精制 利用 234 用于蒜酶的失活和大蒜 2 C 的保留 蒜酶失活率达 B 5 2 C 保 留B B 9 B 第二篇中草药的提取和初步分离 步拓宽 已被用于手性化合物合成和拆分 酶催化反应 细胞的破碎 蛋白质大 分子的分离 物质结晶超细颗粒的制备等领域 超临界流体以其独特的性质给医药 化工 食品等多个行业的研究带来了新契机 第二节固相萃取法 固相萃取 要比 填料 48 大 且由于柱床较短 2 柱 效比 色谱柱低得多 因此用 2 只能分开保留性质有很大差别的化合物

31、就 这一点 2 通常只是用来除去杂质和富集纯化样品的 一 固相萃取剂的种类 4A 吸附剂 硅胶 氧化铝为传统的吸附剂 一直作为样品的预处理 如硅胶柱能用于脂溶性 化合物和类脂的富集纯化 分析氨茶碱时 氧化铝仍用作预分离吸附剂 这类 固相萃取剂的作用机制是溶质与吸附剂在流动相作用下吸附与解吸作用 样品通常 溶于低极性有机溶剂己烷 二氯甲烷 甲苯等 非极性或低极性的杂质先洗脱出柱 用适当极性的溶剂洗脱待测试组分 而对于强极性的仍保留在柱上 45 第二篇中草药的提取和初步分离 另外还有种新型的碳吸附剂如多孔碳 石墨碳具有结构均匀 适用性范围宽的优 点 通常用于醇 酮 酸类化合物的富集纯化 是一种较典

32、型的非极性作用吸附剂 键合硅胶固相萃取剂 最近十几年发展起来的键合硅胶固相萃取剂与 4 4 8A 67 5 7 796B 2 等 它们都是通过疏水作用对非极性脂溶性化合物有强吸附 力 而且组分随着分子量增大在聚合物中保留时间增强 对易离子化的化合物可通过 离子抑制办法而产生保留 另外 反相 多孔聚合物大孔树脂 日本 三菱公司 C9 BD59BE9 1 管型柱 158 公司的 5 A 子弹型柱和天津市经济技术 开发区富集色谱技术发展公司的 BC 型样品净化富集柱 D 可以离线或直线方式进行 离线操作情况下 D 与分析分别独立进行 D 仅为以后的分析提供合适的试样 在线 D 操作可以由自动化仪器完

33、成 自动 D 仪由柱架 注射泵 储夜槽 管线和试样处理器组成 在线 D 又称在线净化和 富集技术 主要用于 DE 分析 通过阀切换将 D 处理试样与分析统一在一个系 统中 F 第二篇中草药的提取和初步分离 四 方法的建立 操作步骤包括由柱预处理 加样 洗去干扰物质和回收分析物质四个步骤 柱预处理 根据对待测组成的物理 化学性质 如极性强弱 溶解度大小 溶液萃取 5 4 6 柱固相萃 取样品 图 3 4 3 为经过不同途经处理样品的 869 分析图 三者相比较可以 看出 固相萃取更能有效地去除浸膏中大量的杂质 其中图 3 显示浸膏经 4 3 柱萃取效果更明显 红豆杉浸膏溶于氯仿液中 取 AB 加

34、到预先处理好的 4 3 柱中 以 CD 第二篇中草药的提取和初步分离 会吸附黄酮 目前大多改用阳离子交换树脂 硫酸盐和磷酸盐脱铅 具有邻 二羟基的黄酮可与硼酸生成溶于水的络合物 借此也可与其他类型的黄酮分离 在实际工作中 常将上述方法配合使用 以达到较好的分离效果 葛根中异黄酮的提取分离是几种方法同时应用的一个实例 首先用甲醇进行提 取 然后用中性乙酸铅除去杂质 滤液用碱式乙酸铅处理得到沉淀 沉淀在乙醇中通 53 复分解 滤液浓缩得到总黄酮 总黄酮上氧化铝柱 用丁醇 水饱和 丁醇 吡 啶 和丁醇 乙酸 洗脱分别得到大豆素 大豆苷 葛根素和葛根苷 二 醌类和蒽衍生物 天然醌类主要有苯醌 萘醌 菲

35、醌和蒽醌 2 种类型 大多具有有用的生理活性 如 第二篇中草药的提取和初步分离 心脑血管活性 抗菌 抗癌等活性 其结构类型较多 难以用一个通用的方法进行有 效地提取和分离 一般可用极性小的有机溶剂如氯仿 苯等提取不含糖的醌类 碱提 酸沉法提取带酚羟基的醌类 水蒸气蒸馏法提取相对分子质量小的苯醌及萘醌类化 合物 有些游离醌类化合物用有机溶剂提取浓缩后即可得到结晶 如果结构中含有 酚羟基或糖与酚羟基结合成苷 则其分离可参照相类似的黄酮类化合物的分离方法 如铅盐沉淀法 梯度法 以及聚酰胺 萃取 层酸化后用乙醚提取 得红褐色糖浆状物 用苯 溶解后经硅胶柱色谱 得白芷内酯 佛手内酯和花椒内酯 经 萃取后

36、的乙醚层 浓缩后得到黄色残留物 溶于苯后经硅胶柱色谱得到补骨内酯和白芷内酯 9 9或 7 对于有内酯结构的木脂素可用碱皂化成盐而与其他亲脂性成分分离 但不宜用 于有旋光活性的木脂素 因为可能引起差向异构化 实例五味子中木脂素的提取分离 五味子果实水煮后干燥 用 8乙醇热提 9 第二篇中草药的提取和初步分离 后浓缩 加水析出絮状沉淀 沉淀用石油醚 乙醇 A A 柱色谱虽然这种吸附剂通常用于叶绿素的脱色 但也 是粗分鞣质的常用材料 一般用 将样品分成几段 然后再用 C DE 或 D 这是一种在硅胶表面 涂布一层具有不同类型 苯酰酯基的聚合糖 其特点是将不同构型的鞣质分开 展开剂常用正己烷 异戊醇

37、为防止拖尾 可加入微量的乙酸 5 薄层色谱吸附剂主要采用硅胶和纤维素 也可用于制备 聚酰胺色谱只能 用于检测 因为许多鞣质可与聚酰胺形成不可逆吸附 硅胶色谱的展开剂一般采用 苯 甲酸乙酯 甲酸 不同比例适用于不同类型和大小的鞣质 纤维色谱和纸色谱 常用 0乙酸水溶液或正丁醇 乙酸 水 26 65 上层 前者适用于儿茶素单体和 水解鞣质 后者适用于鞣花酸鞣质 F 高效液相色谱填料主要采用硅胶 F 和 3键合硅胶 对结构极为类似的化 合物常常可以得到较好的分离 实例白蔹中可水解鞣质的分离 白蔹叶用 4 0的丙酮水溶液高速粉碎提取 两次 每次 2 G 减压回收丙酮至约 H 水溶液 然后分别用乙醚 乙

38、酸乙酯和正 丁醇萃取 取乙酸乙酯部分用 7898 2 柱色谱 乙醇水洗脱 0的乙醇水 洗脱物用 精油的提取 2 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏装置很多 实验室一般采用直接加热 蒸气冷凝 后在油水分离器中分层 水层流入蒸馏瓶继续蒸馏 直到蒸馏完全 溶剂提取法一般用沸点低的溶剂如石油醚 或乙醚在室温下渗 漉 蒸去溶剂即得精油 这种方法与水蒸气蒸馏相比收率高 不易发生变质和水溶性 成分不易混入 但成本较高 一般用于实验室提取或在工业上用于如玫瑰精油等价 格昂贵的精油的提取 直接压榨法用于如柑橘属植物果皮中精油的提取 经直接冷榨 榨出液经 离心分离 即可获得精油 精油的分离和纯化 提取的精油可以先进行处理 以

39、便将复杂的成分分类 然后再进行纯化 精油中 的酸和酚类化合物可用 可使酸和酚 性物质析出 用乙醚萃取可得到酸和酚性物质 醛酮类成分通过亚硫酸氢钠反应可 6 2 第二篇中草药的提取和初步分离 使其从精油中分离出来 然后加碱处理 乙醚萃取可得到醛酮类化合物 在精油的分离纯化中 一般的方法是在除去酚和酸类成分后 采用真空蒸馏和柱 色谱等方法可将精油中大部分成分提纯 方法如下 直接结晶法将精油置于冰箱中在 放置 一些成分可能结晶析出 这种方法一般只能把结晶出的成分部分分离 但操作简单 若某一主要成分含量很 高 部分结晶后也有利于其他成分的分离 洗脱 阳离子交换树脂可将酸性糖和中性糖进行分离 中性糖若与

40、硼酸 络合后也可以用离子交换树脂分离 常用树脂为强碱型阴离子树脂此法同样可用于 分离多元醇 8 乙酸乙酯 2 乙酸 2 水 等 酸性多糖的分离如加入少量十六烷基吡啶氯化物 可使分离软骨素硫酸盐 等多糖获得好效果 离子交换纤维素色谱常用材料为 ABCB 纤维素 二甲氨基乙基纤维素 和 B DB6EC 纤维素 三氯 2 8 2 环丙烷三乙醇胺纤维素 不仅可以用于分离酸性糖 也可以用于分离黏多糖和中性糖 ABCB 是最常用的分离材料 F G 交换容量为 9 G 9 HH I ABCB 含有纤维素 需要进行预处理 可用 9 H IE 7 J 和 9 H IE 5 67 交替洗涤后倾 去上层混浊液 最后

41、混悬在 9 8 H IE 5 67 中 作为碱型装柱 以 F G 89 倍柱体积的 9 H IE 磷酸盐缓冲液洗至适当 7 得到磷酸盐型 以 F G 89 倍柱体积的 9 H IE 硼酸盐缓冲液洗涤后用水洗去无机盐可得到硼酸盐型 酸性多糖在 7 K 易被 ABCB 吸附 亲和力或吸附力的规律有 酸基多 亲和力 强 直链糖中相对分子质量大 吸附力强 直链多糖较支链多糖强 中性多糖在 948 第二篇中草药的提取和初步分离 的吸附力弱 在碱性介质中吸附力强 也可制备成硼酸络合物在硼酸盐型的 0 若溶解 可直接加入乙 醇使多糖沉淀 5 复合物沉淀可溶于有机溶剂 将沉淀溶于乙醇或丙醇 加入 347 透析

42、法 利用一定大小孔径的膜进行透析 大分子糖类不能通过 小分子糖和无机盐透过 而得到分离 一般使用的纤维膜孔小于 5 9 单糖和无机盐可透过 9 膜孔 的膜可使小分子透过加速 多糖则保留 透析时需不断换水 保持 需要几 天时间 透析液浓缩后可用乙醇沉淀多糖 金属离子沉淀法 铜盐沉淀法一般用 0A0 5 0A678 0A 7 F的 0A 7 5使沉 淀完全 若无沉淀则加入乙醇沉淀 离心液再加 0A 7 5溶液和乙醇得第二次沉 8 第二篇中草药的提取和初步分离 淀 母液再加乙醇 如此分级获得各多糖的复合物 分别以 的 42 99 及 年里 气相色谱 0 质 谱 气相色谱 0 红外光谱等联用技术相继出

43、现 改善了气相色谱用于定性分析的能 力 使其真正成为中药材研究 石油化工分析 监测等领域不可缺少的分析手段 二维气相色谱法是近年来发展起来的一种新型色谱方法 借助于冷阱等技术 将 两种不同选择性的气相色谱柱组合 可以得到沿 二维 方向展开的三维谱图 这种 方法尤其适用于超复杂体系样品的分离 甚至可以在同一张谱图上完成上千种组分 的分离 高效液相色谱法 经典液相色谱法采用传统吸附剂作为固定相 流动相在常压下输送 柱效一般较 低 分析周期长 且多不具备在线检测功能 高效液相色谱法是在 世纪 4 年代发 展起来的分离分析方法 由于固定相的改进 流动相采用高压泵输送 使柱效率更 高 分析速度加快 7

44、44 8 4 3A 4 及 B 9 A 4C 等对高效 液相色谱法的发展作出了杰出的贡献 进入 年代 随着高效固定相逐渐被采用及 装柱技术的不断改进 使高效液相色谱柱效进一步提高 提高输液压力 易漏液 不安 全 已不是提高分析效率的惟一途径 高效液相色谱仪主要由进样系统 输液系统 在线检测系统 数据处理系统等部分组成 年 美国 68D EF 9 公司 99 等研制成功采用电导检测器的新型离子交 41 第三篇中药色谱分离技术 换色谱仪 用抑制柱扣除高本底电导 进而检测无机 有机离子 这种方法称为离子色 谱法 离子色谱法使高效液相色谱法的分析领域扩展到分析常见的大多数无 机 有机阴离子及 余种金属

45、阳离子 高效液相色谱与光谱技术联用方法的研究一直是色谱学科的研究热点 世 纪 89 率先采用涂渍在玻璃板上的氧化铝分离药物 因为 这种方法将展开剂滴加在薄层板上 故常称为点滴色谱法 A B C 78D E 8B F 世纪 G 年代 H9 C I 等将吸附剂涂在玻璃板上 用上行法展开 得到了更好的分离 效果 D8 首先提出了薄层色谱法的概念 并使薄层色谱法在术语 器材及操作方 法等方面规范化 D8 与 H9 C I 奠定了现代薄层色谱法的基础 45 J 年 8 8 等 设计的薄层扫描光密度计 使得采用薄层色谱进行 准在线 分析成为可能 进入 世纪 K 年代 薄层色谱法得到较大发展 随着高效薄层板

46、 薄层扫描仪 自动点样装 置及自动展开装置等的商品化 使薄层色谱法的规范化及仪器化程度大为提高 其定 量分析的准确度达到了与高效液相色谱法相当的程度 由于薄层色谱法经济 简便 应用广泛 现已成为药物分析中应用最多的色谱分离模式 J3 毛细管电泳 传统的电泳技术受焦耳热限制 只能在低电场强度下操作 分离时间长 效率低 45 K 年 L D I 最先提出在内径 2 77 的石英管中使用高电场强度进行自由溶液的 区带电泳 通过旋转石英管来减少热效应的影响 45KJ 年 9 D8I I 证明了采用内径 M G 7 的毛细管进行电泳分离的优越性 45K5 年 9NN O 等在内径 7 长 C7 的聚四氟

47、乙烯管中以区带电泳方式分离有机酸 获得了 2J P7 的柱效 45 E IO I 等使用内径 KG 7 毛细管 在 2 N 电压下进行衍生化氨基酸的区 带电泳分离 获得超过 J P7 的理论塔板数 并实现了正 负离子的同时分离 这 一工作可视为毛细管电泳方法发展的里程碑 毛细管区带电泳只适用于荷电粒子的分离 45N9I D9C C 78D E 8B F RH 他们在区带电泳缓冲溶液中加入离子型表面活性剂 使其在溶液中形成胶束 准固定 KJ4 第三篇中药色谱分离技术 相 实现了中性分子的分离 目前 已相继开发出环糊精 离子交换 微 乳液 等多种 准固定相 体系 可适用于不同的分离分析目的 方法已

48、 成为应用非常广泛的电泳模式 6 82 5 电泳方法引进到毛细管电泳中 使毛细管等电聚焦 技术在蛋白质分离中成为 一种强有力的微柱分离手段 达到能分辨 1 等电点仅相差 A 的高分辨率水平 近来 技术还用于蛋白质的形态研究和生物亲和分离 毛细管电色谱是在毛细管电泳基础上发展起来的最新色谱分离模式 虽然这种 分离模式的雏形早在 B 世纪 年代初已经出现 但直至 9 均属于柱色谱 根据固定相的形态不同 填充柱色谱法可进一步分为一般填充柱色谱与连续床 层柱色谱 此外 根据流动相在柱内流向的差别可分成一般柱色谱和逆流色谱两类 平面色谱 等 按色谱过程的分离机制分类 按色谱过程的分离机制可将色谱法分为

49、吸附色谱 分配色谱 空间排阻色谱 离 子交换色谱及亲和色谱等类别 吸附色谱法 4 1 0 固定相为吸附剂 靠组分在吸附剂上 的吸附系数 吸附能力 的差别而达到分离的目的 分配色谱法 1 1 0 固定相为液态 利用样品组分在固定相 与流动相中的溶解度不同所产生的分配系数差别而达到分离的目的 889 与 C89 都属于分配色谱 流动相极性大于固定相极性时 称为反相色谱 E7 反之 称为正 相色谱 F7 空间排阻色谱法 3 1 3G 9 两类 HI 第三篇中药色谱分离技术 离子交换色谱法 2 将固定相的 官能团键合在载体表面 所形成的固定相称为化学键合相 采用化学键合相的色谱 方法称为化学键合相色谱

50、 简称键合相色谱 化学键合相可作为液 毛细管电泳 66 6 9 9 21 毛细管区带电泳依样品组分的荷质 比不同在电场驱动下分离 毛细管电色谱 毛细管凝胶电泳 2 1 及毛细管电动力学 色谱依色谱和电泳两种分离机制分离 毛细管电色谱与一般液相色谱的差别在于流 动相通过电场力 而不是压力驱动 三 不同色谱分离模式的特征 A 气相色谱法的特点 分离效率高 分析速度快由于扩散系数高 样品组分在两相之间可很快进 行分配 而气体的黏度小 流动相通过柱管的阻力也较小 可以采用较长的色谱柱 使 分配系数相差很小的组分在较短的时间内分开 B 样品用量少 检测灵敏度高样品在气态下分离 并在气体中进行检测 有许

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